ډیتیوتریټول (DTT) یو عام کارول شوی کمونکی اجنټ دی، چې د نوي شنه اضافه کونکي په نوم هم پیژندل کیږي. دا یو کوچنی مالیکولي عضوي مرکب دی چې دوه مرکاپتان ګروپونه (-SH) لري. د هغې د کمولو ملکیتونو او ثبات له امله، DTT په پراخه کچه د بایو کیمیا او مالیکولي بیولوژي تجربو کې کارول کیږي.
د DTT اصلي رول په پروټینونو او نورو بایومالیکولونو کې د ډیسلفایډ بانډونو کمول دي. د ډیسلفایډ بانډ د پروټین د فولډ کولو او ثبات یوه مهمه برخه ده، مګر د ځینو تجربوي شرایطو لاندې، لکه د SDS-PAGE کمولو تحلیل، د پروټین بیا ترکیب او فولډ کولو، دا اړینه ده چې د پروټین فضايي جوړښت افشا کولو لپاره د ډیسلفایډ بانډ دوه تیول ګروپونو ته راټیټ شي. DTT کولی شي د ډیسلفایډ بانډونو سره عکس العمل وښيي ترڅو دوی مرکاپتان ګروپونو ته راټیټ کړي، پدې توګه د پروټین فضايي جوړښت خلاصوي او تحلیل او لاسوهنه یې اسانه کوي.
DTT د انزایم فعالیت او ثبات ساتلو لپاره هم کارول کیدی شي. په ځینو انزایم کتلیز تعاملاتو کې، د انزایم فعالیت ممکن د اکسیډنټ لخوا کم شي. DTT کولی شي د اکسیډنټ سره تعامل وکړي ترڅو دوی بې ضرره موادو ته راټیټ کړي، په دې توګه د انزایم فعالیت او ثبات ساتي.
د دودیزو کمولو اجنټانو لکه β-mercaptoethanol (β-ME) په پرتله، DTT یو خوندي او ډیر باثباته کمولو اجنټ ګڼل کیږي. دا نه یوازې په اوبو محلول کې باثباته دی، بلکې د لوړې تودوخې او تیزاب اساس شرایطو لاندې خپل کمولو ملکیتونه هم ساتي.
د DTT کارول نسبتا ساده دي. په عمومي توګه، DTT په یوه مناسب بفر کې منحل کیږي او بیا تجربوي سیسټم ته اضافه کیږي. د DTT غوره غلظت باید د ځانګړي تجربې سره سم وټاکل شي، او عموما د 0.1-1mM په حد کې کارول کیږي. ټیټ غلظت کولی شي د حجرو په وده باندې منفي اغیزې کمې کړي او د هدف پروټینونو د ډیر څرګندیدو له امله سایټوټوکسیت کم کړي. لوړ غلظت ممکن د حجرو ډیر میټابولیک بار رامینځته کړي، چې د حجرو وده او د څرګندیدو موثریت اغیزمن کوي.
د مطلوب غلظت د ټاکلو لاره دا کیدی شي چې د هدف پروټین د څرګندولو کچه په مختلفو غلظتونو کې د IPTG انډکشن ازموینو په ترسره کولو سره ارزونه وشي. د کوچني پیمانه کلتور ازموینې د IPTG غلظتونو (د مثال په توګه 0.1 mM، 0.5 mM، 1 mM، او نور) په کارولو سره ترسره کیدی شي او په مختلفو غلظتونو کې د څرګندولو اغیزه د هدف پروټین د څرګندولو کچې کشف کولو سره ارزول کیدی شي (د مثال په توګه ویسټرن بلاټ یا فلوروسینس کشف). د تجربوي پایلو له مخې، د غوره څرګندولو اغیز سره غلظت د غوره غلظت په توګه غوره شو.
برسېره پردې، تاسو کولی شئ اړونده ادبیاتو یا د نورو لابراتوارونو تجربې ته هم مراجعه وکړئ ترڅو د ورته تجربوي شرایطو لاندې د IPTG غلظت حد په عام ډول کارول کیږي، او بیا د تجربوي اړتیاو سره سم اصلاح او تنظیم کړئ.
دا مهمه ده چې په یاد ولرئ چې غوره غلظت ممکن د مختلف اظهار سیسټمونو، هدف پروټینونو، او تجربوي شرایطو پورې اړه ولري، نو دا غوره ده چې د قضیې په اساس اصلاح شي.
په لنډه توګه، DTT یو عام کارول شوی کمولو اجنټ دی چې د پروټینونو او نورو بایومالیکولونو کې د ډیسلفایډ بانډونو کمولو او د انزایم فعالیت او ثبات ساتلو لپاره کارول کیدی شي. دا په پراخه کچه د بایو کیمیا او مالیکولر بیولوژي تجربو کې کارول شوی.
د پوسټ وخت: سپتمبر-۲۸-۲۰۲۳